Что такое имунноферментный анализ и как он работает?

В настоящее время для выявления инфекции коронавируса в основном используются 2 метода – ПЦР диагностика и иммуноферментный анализ. ПЦР-диагностика позволяет диагностировать заболевание на ранней стадии — на 2-3 сутки после внедрения в организм человека. При этом ПЦР-тесты имеют большой процент ложных результатов, особенно если вирус обнаружен на поздней стадии. Иммуноферментный анализ не определит заболевание на ранней стадии, но более эффективен для определения инфекции на поздней стадии — через 6-7 суток.

Мы решили подробнее узнать, что такое иммуноферментный анализ, как он выполняется на практике и возможно ли делать ИФА анализ вместо ПЦР.

Расскажите, пожалуйста, об иммуноферментном анализе, на чем он основан и как с ним связаны антитела к коронавирусу?

Любой иммуноферментный анализ – реакция, основанная на специфической реакции антиген-антитело. Дело в том, что к каждому антигену (каждой инфекции) вырабатывается только один определенный вид антитела.

Антитела делятся на классы – самые известные иммуноглобулины M (IgM) и иммуноглобулины G (IgG). Антитела класса IgM – это иммуноглобулины, которые первые секретируются в организме человека после того, как инфекция внедрилась в организм – на 6-7 день. Они являются показателями острого инфекционного процесса. Иммуноглобулины G – это поздние антитела, которые образуются уже ближе к концу заболевания. По наличию и уровню IgG антител в крови, можно судить о факте инфицирования в прошлом и определить наличие специфического иммунного ответа – способности организма распознавать вирус при повторной встрече с ним. Иммуноглобулины G сохраняются в организме довольно долгий промежуток времени. Длительность зависит от инфекции. Например, если говорить о COVID-19, то этот срок будет около полугода. Затем IgG угасают и человек может заболеть снова.

Мы в медицинском центре X7 Clinical Research ставим тесты на IgM, чтобы понять болеет ли человек в данным момент или нет, потому что многие люди болеют бессимптомно. Или, что еще хуже, некоторые могут скрывать симптомы, например, отсутствие обоняния. А также, на IgG, чтобы понимать есть ли у человека иммунитет к заболеванию.

А в чем отличие иммуноферментного анализа от теста ПЦР?

ПЦР диагностика – это обнаружение РНК вируса в носоглотке человека. Иммуноферментный анализ – определяет специфичные антитела к коронавирусной инфекции в крови. Здесь есть один существенный момент – результат теста ПЦР зависит от забора материала. Если биоматериал собран неверно, то вирус не найдут. И человек будет свободно ходить и заражать других. В этом случае анализ крови более точен. Однако стоит понимать, что наилучшим образом два теста работают совместно.

Объясните, как работает сам анализатор?

Если коротко и просто, то во время иммуноферментного анализа антитела, находящиеся в сыворотке крови связываются с антигенами, которые находятся на дне лунок специальной плашки (рекомбинантные антигены SARS-CoV-2). При этом происходит специфическое взаимодействие антиген-антитело. Чтобы эта реакция была визуально видна конъюгат подкрашивается специальным красителем. По степени окраски реакции можно судить о количестве антител. Если в сыворотке крови отсутствуют антитела, то специфического взаимодействия не происходит, и цветная реакция отсутствует. Результат определяется по оптической плотности в лунках плашки.

Кроме этого, обязательно в каждой серии ставится контроль: положительный и отрицательный. Если вдруг по каким-то причинам контроль не пройдет, то аппарат обязательно об этом сообщит, тогда результаты исследования нельзя считать достоверными.

В медицинском центре X7 Clinical Research постановка антител на COVID-19 и другие иммуноферментные анализы, проводятся на автоматическом анализаторе Lazurite, производство США. Это сводит человеческий фактор или ошибку к минимуму, а значит повышает качество проводимых тестов.

Справка

Медицинский центр X7 Clinical Research предлагает широкий спектр лабораторных анализов: клинический и биохимический анализ крови, общий анализ мочи, серологическая диагностика инфекционных заболеваний.

Находимся по адресу: проспект Энгельса, 27 лит Т., 3 этаж. Работаем по будням с 8:00 до 20:00. Записаться на анализ вы можете по телефону 8 (812) 643-14-72.

/от

Основополагающим моментом планирования исследования биоэквивалентности является выбор дизайна клинического исследования. Сегодня мы хотели бы поговорить с вами о ключевых критериях выбора дизайна исследования.

Начнем с некоторых основных определений.

Биоэквивалентность — это степень подобия фармацевтически эквивалентного лекарственного средства по отношению к референтному препарату (как правило, к оригинальному средству). Предметом оценки исследований биоэквивалентности являются параметры фармакокинетики препарата: степень и скорость всасывания, время достижения максимальной концентрации в крови, скорость выведения лекарственного препарата.

Также важно рассказать про такое понятие как вариабельность препарата. При разработке документов исследования большое внимание уделяют следующим видам вариабельноти: внутрииндивидуальной (intra-subject) и межиндивидуальной (inter-subject). Измерения показателя у одного человека могут колебаться вокруг некоторой величины — это называется внутрииндивидуальной вариабельностью. Данный коэффициент отражает различия показателей у одного и того же человека в зависимости от биологических ритмов и образа жизни. А межиндивидуальная вариация – это различие показателей внутри определенной группы людей. Она обусловлена некоторыми характерными факторами: расовыми, половыми и возрастными признаками, а также условиями среды.

Фармакокинетика и внутрииндивидуальная вариабельность препарата — это ключевые факторы, от которых зависит выбор типа и дизайна клинического исследования.

Теперь давайте перейдем непосредственно к видам дизайна исследования. Но перед этим важно рассмотреть еще несколько определений – период исследования и период полувыведения. Каждый период исследования сопровождается приемом препарата, то есть обычно напрямую связан с госпитализацией добровольца на 24-72 часа – на период полувыведения препарата. Период полувыведения – время, необходимое для уменьшения вдвое концентрации препарата в крови. В любом исследовании, любого дизайна биоэквивалентности всегда будет учитываться точка полувыведения препарата.

Применительно к исследованиям биоэквивалентности наиболее часто встречаются 4 дизайна: перекрестный, параллельный, полный репликативный, и набирающий популярность в данный момент адаптивный дизайны.

Простой перекрестный дизайн является самым распространенным для исследований биоэквивалентности дженериков, которые быстро выводятся из организма и обладают низкой внутрииндивидуальной вариабельностью. Клиническую часть такого исследования можно провести в сжатые сроки (2-4 недели), при этом риски для добровольцев минимальны.

Схематично можно представить себе дизайн следующим образом:

Параллельный дизайн используют в двух случаях:

1) для препаратов с длительным периодом полувыведения из организма.

2) для токсичных препаратов (нет необходимости повторно подвергать добровольцев действию препарата)

Репликативный дизайн рекомендован для препаратов с высокой внутрииндивидуальной вариабельностью.

Репликативный дизайн характеризуется такой схемой приема лекарственного средства, при которой доброволец получает один из препаратов по меньшей мере 2 раза.  Такой дизайн, как правило, включает не менее 3-х периодов. В случае если все исследуемые препараты принимаются по 2 раза, то такой дизайн называется полным репликативным.

Несмотря на то, что не все добровольцы принимают оба препарата 2 раза, такой дизайн позволяет достичь биоэквивалентности высоковариабельных препаратов.

В настоящее время становится всё более популярным использование адаптивного дизайна.  Адаптивный дизайн исследования может быть рекомендован в случае недостаточности данных о вариабельности препарата и для высоковариабельных препаратов, если проведение репликативного исследования нежелательно, например, из-за высокой токсичности.

Без добровольцев, принимающих участие в клинических исследованиях, невозможна регистрация лекарственного средства. Мы благодарим каждого добровольца за вклад в развитие качественной медицины в нашей стране!

P.S. Стоит отметить, что за участие в клинических исследованиях биоэквивалентности добровольцы получают денежное вознаграждение. В зависимости от дизайна, длительности исследования и лекарственного препарата можно заработать от 12000 рублей. Следите за обновлениями на странице в ВК.

/от